این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
Iranian Journal of Veterinary Research، جلد ۲۱، شماره ۴، صفحات ۲۹۴-۳۰۰
عنوان فارسی توسعه DNA آپتامر به منظور شناسایی بروسلا آبورتوس و بروسلا ملیتنسیس به روش سلکس سلولی
چکیده فارسی مقاله پیشینه:بروسلوز یک بیماری مشترک بین انسان و دام است، توسط گونه‌های بروسلا حادث می‌شود که کوکوباسیل‌های هوازی کوچک درون سلولی هستند، در اندام‌های تناسلی جانوران میزبان قرار می‌گیرند، باعث سقط جنین و عقیم شدن می‌شوند. شناسایی این بیماری بر مبنای روش‌های آزمایشگاهی میکروبیولوژی، سرولوژی و یا واکنش زنجیره‌ای پلیمراز زمان واقعی (RT-PCR) است. اگرچه آزمون‌های میکروبیولوژی و سرولوژی رایج مزایایی دارند، اما قادر به رفع مشکلات تشخیصی نیستند. هدف: برای فایق آمدن بر برخی از محدودیت‌های تکنیک‌های موجود، در مطالعه حاضر ما یک آپتامر را از طریق روش تکامل سیستماتیک لیگاند از طریق غنی‌سازی نمایی (سلکس) در سلول کامل برای تشخیص بروسلا ایجاد کردیم. روش کار: ما از مخلوط بروسلا ملیتنسیس و بروسلا آبورتوس به عنوان هدف استفاده کردیم. به منظور تهیه آپتامر DNA تک‌-رشته‌ای (ssDNA)، کتابخانه DNA با پرایمر معکوس ´5-فسفریله تقویت و با اگزونوکلئاز لامبدا تیمار شد. روش سلکس با انکوباسیون مجموعه ssDNA به همراه سوسپانسیون باکتریایی در بافر اتصال انجام شد. روش‌های منتخب، توسط فلوسایتومتری و با استفاده از پرایمر آغازگر پیش‌رو نشان‌دار شده با FITC کنترل شد. آپتامرهایی با بالاترین میل اتصال به سمت هدف و پایین‌ترین تمایل نسبت به سویه‌های دیگر انتخاب شدند. نتایج: دو آپتامر یعنی B20 و B21 میل اتصال قابل ملاحظه‌ای به بروسلا ملیتنسیس و بروسلا آبورتوس نشان دادند. ثابت تفکیک (Kd) برای آپتامرهای B20 و B21 به ترتیب 06/3 ± 179/40 pM و 465 ± 396/184 pM بود. نتیجه‌گیری: آپتامرهای جدا شده قادر به شناسایی بروسلا ملیتنسیس و بروسلا آبورتوس با راندمان اتصال قابل توجه و Kd اختصاصی در محدوده پیکومول هستند و بنابراین می‌توانند کاندیدای مناسبی در جهت انجام هر آزمایش سنجش سریع در تشخیص معمول بروسلوز باشند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Development of a DNA aptamer to detect Brucella abortus and Brucella melitensis through cell SELEX
چکیده انگلیسی مقاله Background: Brucellosis is a zoonosis, caused by Brucella spp. which are small aerobic intracellular coccobacilli, localized in the reproductive organs of host animals, causing abortion and sterility. The diagnosis of this zoonosis is based on microbiological, serological or real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) laboratory tests. Although the common microbiological and serological based assays have advantages, they are not able to solve the diagnosis problems. Aims: To overcome some of the limitations of present techniques, in this study, we developed an aptamer through whole-cell systematic evolution of Ligands by EXponential enrichment (SELEX) procedures to detect Brucella. Methods: We used mixture of Brucella melitensis and Brucella abortus as the target. In order to prepare the single-stranded DNA (ssDNA) aptamer, the DNA library was amplified with 5´-phosphorylated reverse primer and treated with lambda exonuclease. The SELEX procedure was performed by incubating the ssDNA pool with a bacterial suspension in a binding buffer. The selected procedures were monitored by flow cytometry using FITC-labelled forward primer. Aptamers with the highest binding affinity towards the target and the lowest to other strains were selected. Results: Two aptamers namely B20 and B21 showed significant binding affinity toward B. melitensis and B. abortus. The dissociation constant (Kd) for aptamers B20 and B21 was 40.179 ± 3.06 pM and 184.396 ± 465 pM, respectively. Conclusion: The isolated aptamers were able to identify B. melitensis and B. abortus with a remarkable binding efficiency and appropriated Kd in a picoMolar range and therefore can be good candidates in the development of any rapid assay test implanted on routine brucellosis diagnoses.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Brucella, Cell SELEX, DNA aptamer, Flow cytometry
نویسندگان مقاله Z. Nosaz |
MSc in Microbial Biotechnology, Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahed University, Tehran, Iran

S. Rasoulinejad |
Max Planck Institute for Polymer Research, Ackermannweg 10, 55128, Mainz, Germany

S. L. Mousavi Gargari |
Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahed University, Tehran, Iran

نشانی اینترنتی https://ijvr.shirazu.ac.ir/article_5873_7965d25b65a3ece3661908d86561cf35.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده en
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات