این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه پژوهشی خون، جلد ۱۹، شماره ۴، صفحات ۳۰۱-۳۱۲
عنوان فارسی کلونینگ آنزیم آلفا گالاکتوزیداز با هدف تبدیل آنتی‌ژن B گروه خونی به آنتی‌ژن O
چکیده فارسی مقاله چکیده سابقه و هدف کمبود گروه‎های خونی سیستم ABO یکی از مشکلات متداول مراکز انتقال خون در دنیا می‎باشد. هم‌ ز‌مان با پیشرفت علم مهندسی ژنتیک و تخلیص پروتئین‎ها، تبدیل آنتی‎ژن‎های A و B به آنتی‎ژن O و ایجاد گروه خونی واحد مطرح شد. هدف از این پژوهش، بیان ژن آلفا گالاکتوزیداز در میزبان پروکاریوتی E.coli با ایجاد تغییرات پس از ترجمه و در نهایت تبدیل آنتی‎ژن B گروه خونی به آنتی‎ژن O بود. مواد و روش‌ها در این مطالعه تجربی، ژن آلفا گالاکتوزیداز دانه قهوه که پس از بهینه‎سازی کدون‎ها در پلاسمید pBHA حاوی جایگاه برش آنزیم‎های BamH1 و Nco1 کلون شده بود، در باکتری E.coli سویه TOP10 تکثیر و استخراج شد. ژن آلفا گالاکتوزیداز پس از برش با آنزیم‌های فوق و تخلیص روی ژل آگاروز مجدداً در پلاسمید بیانی pET-20b کلون شده و به باکتری E.coli سویه rosetta 2 (DE3) وارد شد. بیان ژن با استفاده از القاکننده IPTG انجام شد. وجود پروتئین تولیدی با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. آزمون عملکرد پروتئین نیز با توانایی تبدیل گلبول‎های B به O ارزیابی شد. یافته‌ها وسترن بلات و SDS-PAGE وجود پروتئین در پری پلاسم باکتری را تائید کرد. آنزیم تخلیص شده توانست آنتی‎ژن B را به طور نسبی از گلبول قرمز حذف کرده و میزان آگلوتیناسیون با آنتی‎سرم B را به میزان زیادی کاهش دهد. نتیجه گیری بیان پروتئین یوکاریوتی در میزبان پروکاریوتی می‎تواند در تولید انبوه آنزیم گالاکتوزیداز برای کاربرد در مراکز انتقال خون کارگشا باشد. بهینه‌سازی شرایط مختلف بیان برای دستیابی به مقادیر کافی از آنزیم ضروری می‎باشد.  
کلیدواژه‌های فارسی مقاله کلمات کلیدی، گروه خونی، گالاکتوزیداز، E.coli
عنوان انگلیسی Cloning and expression a-galactosidase in order to convert B to O blood group
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Background and Objectives The shortage of different ABO blood groups is a permanent problem that many blood transfusion centers encounter. The conversion of blood group A and B to group O is a solution to this problem. In this research we aimed to clone and express the α-galactosidase enzyme gene to convert the blood group B to O. Materials and Methods In this experimental study, the α-galacosidase gene from coffee bean was codon-optimized and cloned into the pBHA plasmid. After replication in E. coli, plasmid was cut with BamH1 and Nco1 restriction enzymes and the α-galacosidase gene was purified by gel electrophoresis. The gene was then cloned into the expression vector, pET-20b. The expression construct was introduced into E. coli Rosetta 2 (DE3) and the expression of the enzyme was induced by IPTG. The presence of protein production was investigated using SDS-PAGE and Western blotting. Protein function test was also evaluated by the ability of B cells to convert to O cells. Results The presence of the recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blot assay. The purified protein could partially convert blood group B RBCs into group O as detected by decreasing the agglutination strength with B antiserum from 4+ to less than 1+. Conclusions  The production of eukaryotic proteins in a prokaryotic host is a major step in mass production. Optimization of different expression conditions is essential to achieve sufficient amount of enzyme.  
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Key words, Blood Group, Galactosidase, E coli
نویسندگان مقاله افسانه حداد دیلمی | A. Hadad deilami
دانشکده علوم زیستی دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شمال

میترا صالحی | M. Salehi
استادیار دانشکده علم زیستی دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شمال

مجید شهابی | M. Shahabi
استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون

نشانی اینترنتی http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1509-1&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده انتقال خون
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات