این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، جلد ۲۵، شماره ۱۳۲، صفحات ۶۲-۷۳
عنوان فارسی بهینه‌سازی بیان سم شقایق دریایی (فراگاسیاتوکسین C) در باکتری E.coli سویه BL۲۱
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخره‌ای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونه‌های مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین C را جهت دفاع و شکار ترشح می‌کند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین C به اشیرشیاکلی سویه BL21، بیان و یافتن شرایط مطلوب بیان می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی برای انتقال شیمیایی، باکتری‌ها جهت جذب پلاسمید حاوی ژن FraC به‌وسیله کلسیم کلراید سرد شسته و جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری‌ها روی محیط حاوی آنتی‌بیوتیک مناسب (آمپی‌سیلین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش‌تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید GF-1 صورت گرفت. سپس تحت برش آنزیم‌های NcoI وHind ІІІ و هم‌چنین کنترل PCR قرار گرفتند. بعد از تأیید حضور پلاسمید حاوی ژن FraC در باکتری میزبان، باکتری‌ها جهت یافتن شرایط مطلوب بیان پروتئین FraC توسط IPTG 1mM در زمان‌های مختلف و دمای cº20 القا شدند. پس از جمع‌آوری باکتری‌های بیان‌کننده FraC در زمان‌های مختلف، بیان آن‌ها روی ژل سدیم دودسیل سولفات پلی‌آکریل آمید(SDS-PAGE) مشهود بود. یافته‌ها: نتایج ما نشان داد که پلاسمید حاوی ژن FraC با موفقیت انتقال یافت. هم‌چنین نتایج SDS-PAGE نشان داد که FraC در زمان‌های 6 و 8 ساعت با استفاده از IPTG 1mM در دمای cº20 بیش‌ترین بیان را دارند. استنتاج: با توجه به نتایج، هر دو مرحله انتقال شیمیایی تأثیر قابل توجهی در کارایی انتقال دارند. رعایت اصول و دمای مطلوب می‌تواند ما را دریافتن شرایط مطلوب برای بیان هر پروتئین خاص در باکتری‌ها یاری کند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله شقایق دریایی، فراگاسیا توکسین C، انتقال، بیان، اشیرشیاکلی
عنوان انگلیسی Optimization of Sea Anemone Toxin (fragaceatoxin C) Expression in E.coli BL21
چکیده انگلیسی مقاله Background and purpose: Sea anemones of the genus Actinia are commonly found in the intertidal zone of the northern rocky coast of Spain. Actinia fragacea is one of the most important species that secretes a toxic protein, fragaceatoxin C (FraC), for defense and hunting purposes. The aim of this study was transformation of plasmid containing the gene encoding the FraC to Escherichia coli bacterial strain BL21, and identifying optimum expression condition. Materials and methods: In this experimental study, chemical transformation was conducted by washing the bacteria with cold calcium chloride to take up the plasmid containing the FraC gene. To ensure the transformation of plasmids, bacteria were grown on a medium containing an appropriate antibiotic (ampicilin). For greater certainty, the minipreparation of transformed plasmids was done using GF-1 plasmid extraction Kit. The plasmids were then went under digestion check using NcoІ and Hind ІІІ enzymes and PCR check. After confirming the presence of a plasmid containing FraC in the host bacteria, the bacteria were induced by 1mM IPTG in different times at 20 ºC to find the optimum expression conditions. After collecting bacteria expressing FraC at different times, its expression was visualized on Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE). Results: Our results showed that the plasmid containing the FraC was successfully transformed. Also SDS-PAGE results indicated that the FraC was successfully expressed at times of 6 and 8 h using 1mM IPTG at 20 ºC. Conclusion: According to the results, both steps of chemical transformation had significantly influenced the transformation efficiency. Following the principles and selecting optimum temperature could help us in finding the optimum conditions for expression of each specific protein in bacteria.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله بابک عبدی | babak abdi
msc student in biochemistry, department of biology, faculty of science, urmia university, urmia, iran

سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه ارومیه (Urmia university)

رشید جامعی | rashid jamei
associate professor, department of biology, faculty of science, urmia university, urmia, iran
دانشیار بیوشیمی، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه ارومیه (Urmia university)

مهدی ایمانی | mehdi imani
assistant professor, department of basic sciences, faculty of veterinary medicine, urmia university, urmia, iran
ارومیه کیلومتر 11 جاده سرو، دانشگاه ارومیه، دانشکده دامپزشکی
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه ارومیه (Urmia university)

نشانی اینترنتی http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5029-156&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوشیمی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی-کامل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات